產(chǎn)品信息｜Certificate of Analysiss
rPNGase F糖苷酶, 質(zhì)譜級(jí)
訂貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
HLS PNG001C
50ul
rPNGase F 蛋白酶
說(shuō)明: 質(zhì)譜級(jí)PNGase F 糖苷酶特異性水解復(fù)雜的糖蛋白的寡糖和高甘露糖鏈接的天冬酰胺，酶切掉天冬氨酸脫氨基的天冬酰胺,保留低聚糖蛋白
完好無(wú)損。但是不會(huì)去除低聚糖含有α(1→3)核心巖藻糖。
物理形態(tài): 20mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25°C), 50mM NaCl and 5mM EDTA溶液
分子量: 35kDa.
濃度：10unit/ul
儲(chǔ)存條件：存儲(chǔ)在4-10℃冰箱，禁止-20℃以下低溫冷凍
保質(zhì)期：12月在4℃
pH 范圍: PH6.0–10.0 有活性， PH=8.6具有很好活性
適用范圍：特異性酶切糖蛋白的 N端寡糖
溶液內(nèi)酶解SOP:
1.
在 50mM 碳酸氫銨 (pH 7.8)溶液中加入20ug變性的糖蛋白，調(diào)整體積至 18µl.
2.
加 2µl rPNGase F溶液
3. 37°C條件下， 保溫 1–2 小時(shí)酶切糖蛋白樣品
活性: 40000unit/min/mg；
單位定義：PNGase F糖苷酶每分鐘酶切1.0 umole Ribonuclease B的量，反應(yīng)條件：37℃，PH=7.5
質(zhì)量控制｜Quality Control
純度： 使用Maldi TOF檢測(cè)雜質(zhì)蛋白質(zhì)峰強(qiáng)度，rPNGase F峰峰高比大于99.5%
活性:40000unit/min/mg；單位定義：rPNGase F蛋苷酶每分鐘酶切1.0 umole 變性的Ribonuclease B的量，SDS-PAGE分析定量。
Mal
di TOF質(zhì)譜檢測(cè):
變性的RNase B 使
用rPNGase F糖苷酶在37°C酶切60min后，使用
FA基質(zhì)激光解析質(zhì)譜分析，可見切糖后的重鏈蛋白
14.9kDa和輕鏈蛋白14
.1
kDa質(zhì)譜峰，未見雜質(zhì)蛋白信號(hào)
,糖蛋白的糖切除*。
LC-MS/MS 質(zhì)譜分析: 變性的RNase B經(jīng)過PNGase F去糖處理,蛋白又使用Trypsin酶切成肽段，質(zhì)譜鑒定到理論肽段9條，覆蓋率67%。
