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　　合成著色劑又稱合成色素，主要是以苯、甲苯等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過磺化、偶合、縮合、偶氮化等一系列反應(yīng)制成。中國食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)列入的合成色素主要有胭脂紅、莧菜紅、日落黃、赤蘚紅、檸檬黃、新紅、靛藍(lán)、亮藍(lán)等等。與天然色素相比，合成色素顏色更加鮮艷，不易褪色，且價格較低，色調(diào)多樣，故被廣泛應(yīng)用。但是長期大量使用將會對身體造成傷害，因此需要對合成著色劑的添加量進(jìn)行檢測。

　　合成著色劑少量食用可經(jīng)肝腎代謝排出體外，但是若長期或一次性大量食用素含量超標(biāo)的食品，可能會引起過敏、腹瀉等癥狀。當(dāng)攝入量過大，超過人體器官負(fù)荷時，會在體內(nèi)蓄積，對腎臟、肝臟產(chǎn)生一定傷害。胭脂紅等染色劑還會使人體的免疫力下降，并且增加癌癥的發(fā)病率，因此飲品中的著色劑的使用必須控制在合適的范圍，而對著色劑含量的檢測也具有十分重要的意義。

　　本實(shí)驗參考《GB 5009.35-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中合成著色劑的測定》，采用我司新推出的聚酰胺固相萃取小柱對樣品進(jìn)行前處理，使用我司iChrom 5100液相色譜儀對著色劑標(biāo)準(zhǔn)品，線性以及加標(biāo)回收率等進(jìn)行檢測方法驗證，并且檢測實(shí)際蔬菜汁中檸檬黃、胭脂紅、日落黃的添加情況。

　　1.1設(shè)備與試劑

　　實(shí)驗過程中其它玻璃器皿還包括棕色容量瓶(50mL、100mL)、移液槍(0——1000µL)、移液槍槍頭(1mL、5mL)、一次性PVC手套、一次性口罩、50mL塑料離心管、10mL塑料離心管等若干。

　　1.2實(shí)驗方法

　　【試劑及相關(guān)溶液配制】

　　0.02mol/L乙酸銨溶液：稱取1.54g乙酸銨樣品于1000mL水中充分溶解后，然后0.45µm濾膜過濾后備用。

　　混標(biāo)儲備液：準(zhǔn)確稱取檸檬黃、胭脂紅、日落黃標(biāo)準(zhǔn)品各10mg，至50mL容量瓶中，用水溶解后定容即得200µg/mL的混標(biāo)溶液。

　　標(biāo)準(zhǔn)混合工作液：移取不同體積的混標(biāo)溶液，用流動相稀釋，得到的濃度分別為100µg/mL、50µg/mL、40µg/mL、20µg/mL、10µg/mL、5µg/mL、1µg/mL。

　　【樣品前處理】

　　樣品提取

　　稱取試樣1.0 g(至0.001 g)于50 mL離心管中，加入6 mL 去離子水，渦旋30 s，超聲振蕩提取15 min，4000 r/min離心5 min，取上清液。剩余殘渣再加入6 mL去離子水，重復(fù)操作一次。合并兩次上清液。用20%檸檬酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH=3——4，待上樣。

　　SPE柱凈化

　　(1)活化：凈化前用5 mL甲醇、5 mL去離子水活化。

　　(2)上樣和洗脫：將提取液以1 mL/min的速度過柱，棄去濾液，用5 mL淋洗液（甲醇：甲酸：水=4:2:4）淋洗，棄去淋洗液，將小柱抽干，再用6 mL 10%氨化甲醇溶液洗脫并收集洗脫液。

　　(3)重新溶解：45℃緩慢氮吹至近干，加2 mL 混合流動相（A:B=1:1）溶解。渦旋混合1 min，用0.45 μm濾膜過濾后，待上機(jī)測試。

　　【色譜條件】

　　流動相：A：甲醇；B：0.02mol/L乙酸銨溶液

　　色譜柱：SinoChrom ODS-BP 5µm 4.6×250mm

　　流速：1.0mL/min

　　檢測波長：254nm

　　進(jìn)樣體積：10μL

　　柱溫：30℃

　　1.3實(shí)驗結(jié)果

　　【典型分析譜圖】

　　【線性相關(guān)】

　　分別移取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制濃度分別為1µg/mL、5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL、40µg/mL、50µg/mL、100µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)混合工作液。按濃度由低至高進(jìn)樣分析，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線，檸檬黃、胭脂紅和日落黃的線性相關(guān)性結(jié)果如下。

　　【小檢出限】

　　本系統(tǒng)的基線噪聲為25µV，根據(jù)3倍信噪比，儀器的小檢出限分別為檸檬黃20ng/mL，胭脂紅25ng/mL，日落黃18ng/mL。根據(jù)前處理方法計算，各目標(biāo)物的方法檢出限分別為檸檬黃20µg/kg，胭脂紅25µg/kg，日落黃18µg/kg，參見表7。

　　【加標(biāo)回收率】

　　添加水平為4.0mg/kg的果蔬汁樣品，經(jīng)過處理后分析，得到的加標(biāo)回收率見表8。

　　結(jié)論：

　　采用我司新推出的聚酰胺固相萃取小柱對樣品進(jìn)行前處理，利用iChrom 5100液相色譜儀，參考《GB 5009.35-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中合成著色劑的測定》方法并對實(shí)驗條件做進(jìn)一步優(yōu)化后，測得目標(biāo)物線性關(guān)系優(yōu)良，小檢出限滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，加標(biāo)回收率結(jié)果良好。

　　因此采用我司的iChrom5100液相色譜儀，利用該方法測試果蔬汁飲料中的合成著色劑含量時，儀器靈敏度高、定性和定量準(zhǔn)確，良好的儀器精密度，能滿足果蔬汁飲料中合成著色劑的含量測定。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1] 《GB 5009.35-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中合成著色劑的測定》

　　[2]  GB 2760-2014 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)

　　附錄：