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固相萃取儀的操作方法

2019年10月08日 11:51

　　【儀器網使用手冊】固相萃取儀是液固萃取柱和液相色譜技術結合發(fā)展而來的樣品預處理技術，可用于樣品的分離、純化和濃縮，廣泛應用于醫(yī)藥、食品、環(huán)保等領域。

　　1.選擇小柱或濾膜

　　小柱或濾膜的大小與規(guī)格應視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內樣品, 一般應選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。

　　2.活化

　　萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml 溶劑沖洗濾膜使填料保持濕潤, 因為填料干燥會降低樣品保留值，而各小柱的干燥程度不一,也會影響回收率的重現(xiàn)性。

　　3.上樣

　　一般可采取以下四種方法：

　　(1) 用0.1mol/L 酸或堿調節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃取；

　　(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃??；

　　(3)用酸或無機鹽沉淀蛋白質后取上清液, 調節(jié)pH 值后萃取；

　　(4)超聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取。流速應控制為1ml/min, 流速快不利于待測物與固定相結合。

　　4.淋洗

　　反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積, 而SPE濾膜為5～10ml。

　　5.洗脫

　　應選用5～10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動相重組殘留物后進樣。體內樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC 分析柱分析洗脫物。

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