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超微量紫外分光光度計(jì)的應(yīng)用

來(lái)源:杭州嘉維創(chuàng)新科技有限公司   2023年11月20日 09:37  

      超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)是通過(guò)檢測(cè)物質(zhì)波長(zhǎng)處或某一波長(zhǎng)范疇內(nèi)光的吸收度,對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量與定量分析的儀器設(shè)備,目前已成為現(xiàn)代分子生物學(xué)、藥物學(xué)、食品科學(xué)等領(lǐng)域的常用儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。  

1、核酸的定量  

  核酸的定量是超微量分光光度計(jì)使用頻率的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長(zhǎng)260nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。

2、核酸的純度檢測(cè)  

  除了核酸濃度,超微量分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,如:  

(1)A260/A280的比值,用于評(píng)估樣品的純度,因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。  

(2)A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。   

3、蛋白質(zhì)直接定量  

  這種方法是在280nm波長(zhǎng),直接測(cè)試蛋白。超微量分光光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應(yīng)的換算方法,將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì),一般要消除320nm的"背景"信息,設(shè)定此功能"開(kāi)"。與測(cè)試核酸類似,要求A280的吸光值大于0.1A,的線性范圍在1.0-1.5之間。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測(cè)試較純凈、成分相對(duì)單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對(duì)于比色法來(lái)說(shuō),速度快,操作簡(jiǎn)單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。  

4、比色法蛋白質(zhì)定量(顏色反應(yīng))  

  蛋白質(zhì)比色法測(cè)定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。  

比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry等幾種方法。  

由于各種方法反應(yīng)的基團(tuán)以及顯色基團(tuán)不一,所以同時(shí)使用幾種方法對(duì)同一樣品得出的樣品濃度無(wú)可比性。所以在選擇比色法之前,最好是參照要測(cè)試的樣本的化學(xué)構(gòu)成,尋找化學(xué)構(gòu)成類似的標(biāo)準(zhǔn)蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品。  

5、OD600(菌落密度)  

  實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長(zhǎng)密度和生長(zhǎng)期,多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測(cè)推斷細(xì)菌的生長(zhǎng)密度。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn),需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。通過(guò)檢測(cè)600nm處細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)的吸光度,從而監(jiān)測(cè)微生物或其他細(xì)胞培養(yǎng)的生長(zhǎng)率。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)方法。實(shí)驗(yàn)中偶爾會(huì)出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負(fù)值,原因是采用了顯色的培養(yǎng)基,即細(xì)菌培養(yǎng)一段時(shí)間后,與培養(yǎng)基反應(yīng),發(fā)生變色反應(yīng)。


   杭州嘉維創(chuàng)新科技有限公司是多家先進(jìn)儀器制造商的合作伙伴。代理銷售京都電子KEM、紡吉萊博Fungilab、格哈特Gerhardt、東京理化EYELA、威伊WELCH、日立、isco、CEM、biotek、布魯克海文Brookhaven、布勞恩MBRAUN、雅馬拓yamato、賽默飛世爾Thermo等公司的全自動(dòng)電位滴定儀、旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)、定氮儀、脂肪儀、纖維素測(cè)定儀、溶劑純化系統(tǒng)、手套箱、平行蒸發(fā)儀、真空濃縮儀、微通道反應(yīng)器、微波合成儀、流動(dòng)反應(yīng)器、平行合成儀、反應(yīng)量熱儀、低溫反應(yīng)器、低溫冷卻液循環(huán)泵、冷水機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、分子蒸餾儀、冷凍干燥機(jī)、噴霧干燥機(jī)、快速制備色譜儀、質(zhì)構(gòu)儀、粒度儀、酶標(biāo)儀、真空泵等設(shè)備,并提供技術(shù)售后服務(wù)。


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