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高速逆流色譜是一種液-液色譜技術(shù)，固定相與流動(dòng)相都是液體，不需要固態(tài)載體支撐。雖然這讓高速逆流色譜有了沒(méi)有不可逆吸附、無(wú)污染、樣品無(wú)損失等特點(diǎn)，但是也讓固定相的液體在色譜柱中的保留程度對(duì)分離過(guò)程有非常大的影響。因此操作人員需要掌握影響固定相保留率的因素。固定相保留率的影響因素有以下幾點(diǎn)：
1.溶劑體系
所選擇的溶劑體系對(duì)固定相保留率有很大的影響，如兩相密度差、粘度、界面張力等。通過(guò)研究表明，兩相的密度差對(duì)固定相保留率的影響大，固定相保留率和密度差基本呈線性關(guān)系。
2.螺旋管柱的轉(zhuǎn)速
螺旋管柱的轉(zhuǎn)速以及它產(chǎn)生的離心力場(chǎng)對(duì)兩相的混合程度具有決定性的影響。因此，對(duì)于界面張力較高的溶劑系統(tǒng)，應(yīng)使用較高的轉(zhuǎn)速，以使兩相之間能夠劇烈的混合，從而促進(jìn)分配和減少質(zhì)點(diǎn)傳遞的阻力。對(duì)于界面張力較低的溶劑系統(tǒng)，應(yīng)使用較低的轉(zhuǎn)速，以避免過(guò)分混合引起的乳化作用，以及固定相流失的問(wèn)題。
3.流動(dòng)相流速方面
固定相保留率和流速平方根之間具有線性關(guān)系。
4.儀器的柱溫
儀器的柱溫對(duì)于親水性強(qiáng)的正丁醇溶劑體系的固定相保留率影響較大，升溫能改變?nèi)軇┑恼扯?，進(jìn)而影響兩相的分層時(shí)間。在50℃~60℃時(shí)，正丁醇體系的分層時(shí)間短，在該溫度下可以改善固定相的保留率。然而，對(duì)于大部分的疏水性溶劑體系，由于兩相分層快，柱溫升高后兩相分層時(shí)間縮短不明顯，因而對(duì)改善保留率的效果不明顯。
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