【主要組成成分】
主要成分
組分 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
包被微孔板 | 96T | 1板 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 3.6ng/450uL | 2管 |
抗體 | 80uL | 1管 |
辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素 | 150uL | 1管 |
10×檢測緩沖液 | 5mL | 1瓶 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 5mL | 1瓶 |
TMB顯色液 | 10mL | 1瓶 |
TMB終止液 | 10mL | 1瓶 |
洗滌緩沖液(20X) | 30ml | 1瓶 |
封板膜 | | 4張 |
注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否*
【檢測步驟】
檢測之前請將所有的試劑、樣本平衡至室溫。
1. 準(zhǔn)備好所有需要的試劑及工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品。
2. 將不需要的板條拆卸下來，放回裝有干燥劑的鋁箔袋，重新封好封口。
3. 加入 300 μl 1×洗液靜置浸泡 30 秒。為了獲得理想的實驗結(jié)果浸泡是必須的。棄掉洗液之后， 在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后，請立即使用微孔板，不要讓微孔板干燥。
4. 標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 50 μl 1x檢測緩沖液和50ul2倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品?？瞻卓准尤?50ul 1x 檢測緩沖液和50ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。
5. 樣本孔加入 80μl 1×檢測緩沖液和 20 μl 樣本。
6. 每孔加入 50 μl 稀釋的檢測抗體。保證步驟 4、5、6 連續(xù)加樣，不要間斷。加樣過程在 15 分 鐘內(nèi)完成。
7. 使用封板膜封板。300 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩，室溫孵育 1.5小時。
8. 棄掉液體，每孔加入 300 μl 洗液洗板，洗滌 6 次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的 實驗性能，必須*移除殘留液體。
9. 每孔加入 100 μl 稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。
10. 使用新的封板膜封板。300 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩，室溫孵育30分鐘。
11. 重復(fù)步驟 8。
12. 每孔加入 100 μl 顯色底物 TMB，避光，室溫孵育 5 - 30 分鐘。
13. 每孔加入 100 μl 終止液。顏色由藍色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化明顯不均 勻，請輕輕叩擊板框，充分混勻。
14. 在 30 分鐘之內(nèi)，使用酶標(biāo)儀進行雙波長檢測，測定 450 nm 大吸收波長和 570 nm 或 630 nm 參考波長下的 OD 值。校準(zhǔn)后的 OD 值為 450 nm 的測定值減去 570 nm 或 630 nm 的測定值。 僅使用 450 nm 測定會導(dǎo)致 OD 值偏高，并且準(zhǔn)確度降低。
