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國標委發(fā)布《高致病性禽流感診斷技術(shù)》新增RT-PCR等兩種檢測方法

2021-01-26 11:03:23來源：化工儀器網(wǎng)關(guān)鍵詞：PCR閱讀量：3130

　　【儀器網(wǎng) 時事聚焦】2020年12月初，法國農(nóng)業(yè)部發(fā)表聲明中，法國國家衛(wèi)生安全署(ANSES)參考實驗室確認，該國西南部一家養(yǎng)殖場有6000只鴨子感染H5N8型病毒，并發(fā)現(xiàn)大量鴨子迅速死亡。2021年1月6日，法國農(nóng)業(yè)部后續(xù)通報，該國朗德省(Landes)養(yǎng)禽場發(fā)生22起家禽H5N8亞型高致病性禽流感疫情，5121只家鴨和珍珠雞感染，274只死亡，2.5萬只被撲殺。

　　近幾年，H5N8型病毒已先后在歐洲以及日本、韓國、中國臺灣等多個國家和地區(qū)均發(fā)生過規(guī)模化爆發(fā)，引發(fā)了多方關(guān)切。

　　為保護我國畜牧業(yè)安全，加強高致病性禽流感的診斷技術(shù)，確保第一時間發(fā)現(xiàn)疫情，做到可防可控。近日，國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會正式發(fā)布《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(G/B T 18936—2020)國家標準，該標準由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、中華人民共和國北京海關(guān)、中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心等單位負責(zé)起草。

　　標準規(guī)定了高致病性禽流感臨床診斷，樣品采集、保存與運輸，病毒分離與鑒定，血凝和血凝抑制劑試驗，禽流感病毒RT-PCR試驗和禽流感病毒熒光RT-PCR試驗的技術(shù)要求。

　　本標準將代替《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(G/B T 18936—2003)標準，與舊標準相比，新標準在技術(shù)方面出現(xiàn)幾點變化：一是增加了禽流感病毒RT-PCR試驗；二是增加了禽流感病毒實時熒光RT-PCR試驗；三是刪除了瓊脂凝膠免疫擴散(AGID)試驗；四是刪除了間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。

　　此次新增的禽流感病毒RT-PCR試驗和熒光RT-PCR試驗主要適用于檢測禽組織、分泌物、排泄物等物質(zhì)中的禽流感病毒核酸。

　　目前 PCR 技術(shù)只能擴增 DNA 模板，對 RNA 模板不能直接擴增。 mRNA反轉(zhuǎn)錄生成的 cDNA 可作為 PCR 的模板進行擴增，這種在 mRNA 反轉(zhuǎn)錄后進行的 PCR 擴增稱為 RT-PCR 。其特點是雜交靈敏度高，對 RNA 的質(zhì)量要求較低，操作簡便。目前該技術(shù)廣泛應(yīng)用于分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)等科研中。

　　而實時熒光RT-PCR(熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng))指的是在PCR進行的同時，對其過程進行實時監(jiān)測的能力，數(shù)據(jù)可在PCR擴增過程中進行收集，而非在PCR結(jié)束之后，反應(yīng)以循環(huán)中首次檢測到目標擴增的時間點為特征，而非在一定循環(huán)數(shù)后目標分子累計的擴增量。目標核酸的起始拷貝數(shù)越高，則會越快觀察到熒光的顯著增加。相反，終點法檢測(也稱 “讀板檢測”)測量的是PCR循環(huán)結(jié)束時累計的PCR產(chǎn)物量。

　　在儀器設(shè)備方面，新標準對適用儀器PCR擴增儀及配套反應(yīng)管、高速臺式冷凍離心機、生物安全柜、微量移液、熒光PCR儀等的配備要求及操作規(guī)范做了清晰的介紹。

　　標準是科學(xué)、技術(shù)及實驗經(jīng)驗的總結(jié)。每一項標準的出臺都是因時因需而生，標準的制定為某個領(lǐng)域在一定范圍內(nèi)達到秩序起到良好的規(guī)范作用。時隔18年，《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(G/B T 18936—2020)國家標準的發(fā)布，對于高致病禽流感病毒的檢測工作具有重要的技術(shù)指導(dǎo)意義。

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